云南省中缅边境2015年一起登革热暴发的分子特征分析

目的 对2015年云南省中缅边境一起登革热暴发查明病因,对流行的登革病毒(DENV)进行分子特征分析,为疾病防控提供病原学证据。方法 采用半巢式RT-PCR方法检测2015年7月云南省耿马县孟定镇DENV NS1抗原阳性血清中的DENV特异核酸(CprM基因),对阳性标本用DENV E基因特异引物进行扩增,并将PCR产物送测序,经拼接剪切后的序列在NCBI网站进行BLAST比对,在Megalign中计算核苷酸相似性;在GenBank中选出不同国家和地区不同年度的DENV E基因序列作为参考序列,在Mega 5.05 软件中采用邻接(NJ)法构建系统进化树。结果 对25份中国云南省耿马县孟定镇本地病例和14份缅甸输入病例DENV NS1抗原阳性的血清标本进行DENV特异核酸检测,共有21份本地和10份缅甸输入病例标本为DENV-1阳性,其余8份为DENV阴性。测序得到13株(8株来源于本地病例,5株来源于输入病例)1 485 bp的E基因序列,核苷酸相似性为100%,12株(9株来源于本地病例和3株来源于输入病例)406 bp的CprM基因序列,核苷酸相似性为100%。系统进化分析显示,13株E基因序列均属于DENV-1的基因Ⅰ型,位于独立的进化分支。结论 本次登革热暴发由DENV-1的基因Ⅰ型引起,该病毒与相邻缅甸区域流行的DENV进化关系最近,当地需加强对登革热防控的综合措施,以防止登革热疫情的进一步扩散。     

云南省埃及伊蚊对拟除虫菊酯类抗性群体的击倒抗性基因突变分析

目的 检测云南省登革热重点地区对氯菊酯和高效氯氟氰菊酯杀虫剂已产生抗性的埃及伊蚊的击倒抗性(knockdown resistance,kdr)基因,进行基因突变分析,阐明抗性表型与kdr基因突变的关系。方法 收集云南省景洪市、勐腊县、勐海县、瑞丽市和耿马县经过氯菊酯和高效氯氟氰菊酯杀虫剂测定的埃及伊蚊成蚊样本,分别提取单蚊基因组DNA,Allele-specific PCR(AS-PCR)扩增和分析其kdr部分基因片段,统计抗性与敏感表型中kdr突变的基因型和基因频率。结果 共580份雌性埃及伊蚊样本被用于V1016G和F1534C击倒抗性突变的检测。V1016G的突变频率为99.83%(579/580),F1534C的突变频率为46.38%(269/580)。V1016G和F1534C突变频率差异存在统计学意义(χ²=421.338,P=0.000)。5个埃及伊蚊种群中,V1016G突变率除了瑞丽市外,其他区域均达到100.00%。F1534C突变率景洪市最高为84.16%,耿马县最低为5.66%。抗性表型与敏感表型的V1016G和F1534C突变率差异均存在统计学意义(χ²=7.298,P=0.007;χ²=14.010,P=0.000)。580份样本中,有65份样本同时存在V1016G和F1534C位点突变,突变率为11.21%;不同地区同时突变率范围为0~33.66%,景洪市同时突变率最高为33.66%。结论 云南省登革热重点地区埃及伊蚊种群存在V1016G和F1534C突变,V1016G突变率高且分布广,F1534C突变以景洪市埃及伊蚊种群为最高。敏感表型与抗性表型V1016G和F1534C突变存在差异,提示抗性产生与突变存在一定的关系。     

From discovery to spread: The evolution and phylogeny of Getah virus

Getah virus (GETV) was first isolated in Malaysia in 1955. Since then, epidemics in horses and pigs caused by GETV have resulted in huge economic losses. At present, GETV has spread across Eurasia and Southeast Asia, including mainland China, Korea, Japan, Mongolia, and Russia. Data show that the Most Recent Common Ancestor (MRCA) of GETV existed about 145 years ago (95% HPD: 75–244) and gradually evolved into four distinct evolutionary populations: Groups I–IV. The MRCA of GETVs in Group III, which includes all GETVs isolated from mosquitoes, pigs, horses, and other animals since the 1960s (from latitude 19°N to 60°N), existed about 51 years ago (95% HPD: 51–72). Group III is responsible for most viral epidemics among domestic animals. An analysis of the GETV E2 protein sequence and structure revealed seven common amino acid mutation sites. These sites are responsible for the structural and electrostatic differences detected between widespread Group III isolates and the prototype strain MM2021. These differences may account for the recent geographical radiation of the virus. Considering the economic significance of GETV infection in pigs and horses, we recommend the implementation of strict viral screening and monitoring programs.     

云南楚雄2014年蚊媒及其病毒感染调查

目的了解云南楚雄元谋、武定和双柏3县蚊虫及其主要虫媒病毒种类,为制定出有效的虫媒传染病防控对策提供依据。方法2014年6-7月采用诱蚊灯在调查点通宵捕捉蚊虫,对现场采集蚊虫进行形态分类鉴定;采用C6/36细胞培养法和RT-PCR扩增目的基因片段对蚊虫体内病毒进行分离、鉴定。结果共捕获4属15种12 384只蚊虫,三带喙库蚊、中华按蚊、致倦库蚊和微小按蚊分别占捕获蚊虫总数的59.95%、19.31%、10.90%和 4.13%;C6/36细胞培养处理116组蚊虫,其中29组发生细胞病变,经基因鉴定为版纳病毒(BAV)、Totivirus 病毒(TOV)、乙型脑炎病毒(JEV)和Nam Dinh病毒(NDiV)4种,其中,三带喙库蚊的JEV、BAV、TOV和NDiV基因扩增批阳性率分别为1.87%、11.32%、3.77%和9.43%;希氏库蚊的NDiV基因扩增批阳性率为25.00%;致倦库蚊和中华按蚊的BAV、NDiV批阳性率分别为20.00%、33.34% 和5.00%、7.50%。结论楚雄地区蚊虫种类多,且以三带喙库蚊和中华按蚊为优势蚊种,从两种蚊虫标本中能分离到JEV、TOV、BAV和NDiV病毒,表明调查地区发生乙脑及其它虫媒病毒性疾病流行的危险较大。